1 精液品質檢查
(1)采精量。采集精液后稱重,按每克1mL計,避免以量筒等測量精液的體積。
(2)顏色。正常的精液是乳白色或淺灰色,精子密度越高,色澤愈濃,透明度愈低。帶有綠色、黃色、淺紅色、紅褐色等異常顏色的精液應予廢棄。
(3)氣味。豬精液略帶腥味,如有異常氣味,應廢棄。
(4)pH值(酸堿度)。用pH計或pH試紙測量,正常范圍為7.0~7.8。
(5)精子活力檢查。精子活力是指呈直線運動的精子所占百分率,在顯微鏡下觀察,一般用0.1~1.0的十級評分法估計,鮮精活力要求不低于0.7。檢查活力時要求載玻片和蓋玻片都應在37℃下預熱。
(6)精子密度。指每毫升精液中所含的精子數,是確定稀釋倍數的重要標準。要求用血細胞計數板計數或精液密度儀測定。血細胞計數方法:以微量加樣器取具有代表性的原精液200ul,用3%NaCl稀釋10倍;在血細胞計數板上放一蓋玻片,取1滴稀釋后的精液置于計數板的槽中,靠虹吸將精液吸入計數室內;在高倍鏡下計數5個中方格內的精子總數,將該數乘以50萬,即得到原精液每毫升的精子數(即精液密度)。
(7)精子畸形率。畸形率是指異常精子的百分率,一般要求畸形率不超過18%。其測定可用普通顯微鏡,但需進行伊紅或姬姆薩染色,用相差顯微鏡可直接觀察活精子的畸形率。公豬利用過頻或高溫環境會產生精子尾部帶有原生質滴的畸形精子。畸形精子種類很多。要求對每頭公豬每2周檢查一次精子畸形率。
2 精液的稀釋、分裝和儲存
(1)稀釋液。稀釋液按稀釋液配方配制(D-葡萄糖37.15,檸檬酸三鈉6.00,EDTA鈉鹽1.25,碳酸氯鈉1.25,氯化鉀0.75,青霉鈉0.60,硫酸鏈霉素1.00),用稱量紙、電子天平準確稱量藥品;按1000mL和2000mL劑量稱量稀釋粉,置于密封袋中;在大燒杯或塑料杯中套入一到兩層一次性食品袋,然后將稀釋粉加入,再將燒杯(或塑料杯)放在電子秤上,除皮重;通過與蒸餾水容器連接的軟管將蒸餾水導入杯中(最初放出的幾毫升水用其它杯接取廢棄),直到將水加至規定的重量(如1000g即約1000mL);將杯子放入水浴中加熱,加熱后輕輕搖動,使其徹底溶解。某些稀釋粉遇水后結塊,溶解較慢,需將加熱時間延長一些。稀釋粉全部溶解后,在水浴中繼續加熱至所需的溫度。用0.1N稀鹽酸或0.1N氫氧化鈉調整稀釋液的pH值達7.2(6.8~7.4)左右,稀釋液配好后應及時貼上標簽、標明品名、配制日期和時間、經手人等。將稀釋液置于冰箱內4℃下保存,時間不超過24小時。
(2)原精液稀釋后體積計算。原精液總有效精子數=原精液體積(或重量g)×精子密度(單位:個/mL)×活率。原精液稀釋后可分裝的份數=原精總有效精子數/每份精液中的有效精子數。原精液稀釋后的體積(或重量)=原精液稀釋后可分裝的份數(取整數)×每份精液的體積(或重量)。每份精液中有效精子數推薦為30億。
(3)精液稀釋。精液采集后應盡快稀釋,原精儲存不超過30分鐘。未經品質檢查或檢查不合格(活力在0.7以下)的精液不能稀釋。稀釋液與精液要求等溫稀釋,兩者溫差不超過1℃,即稀釋液應加熱至33~37℃,以精液溫度為標準來調節稀釋液的溫度,絕不能反過來操作。稀釋時用一個塑料杯(1000~1500mL)放在電子秤上,除皮后將裝精液的采精袋從保溫杯中取出,放入大塑料杯中,并將袋口翻在杯外。如果集精容器為一次性紙杯,則需將紙杯中的精液倒入裝有食品袋的塑料杯中并放在電子秤上。也可在此時稱量并記錄精液重量。然后向杯中徐徐加入與精液等溫的稀釋液,直到達到所計算的最終重量。
(4)精液分裝。一次性輸精瓶的分裝。將塑料杯中稀釋后的精液分別加入不同的輸精瓶中,使精液面達到輸精瓶上相應的刻度(如100mL),然后擰上輸精瓶蓋。一次性輸精袋分裝。將輸精袋的兩個懸掛孔掛在專門用于分裝精液的支架上,在輸精袋中插上一次性塑料漏斗,放在電子秤上,然后除皮。將塑料杯中稀釋后的精液通過漏斗徐徐加入輸精袋中,直到達到規定的重量(如100g),取下漏斗和輸精袋,掛上一個新的輸精袋,再將漏斗插入,分裝另一袋精液。分裝后的輸精袋用塑料熱封口機封口。在輸精瓶或袋上標明公豬品種、耳號、生產日期、保存有效期、稀釋液名稱和生產單位等。
(5)精液儲存。將分裝后的輸精容器放入泡沫塑料盒中,在室溫下緩慢降溫30分鐘后,再將輸精容器放入17℃恒溫箱內的擱架上保存。保存過程中不要頻繁打開冰箱,并且每隔12小時輕輕翻轉一次,防止精子沉淀而引起死亡。短效稀釋液可保存3天,中效稀釋液可保存4~6天,長效稀釋液可保存7~9天,無論用何種稀釋液保存精液,都應盡快用完。