摘要：目的：進行藥敏紙片法和打孔法檢測細菌耐藥性的方法比較。方法：將青霉素、鏈霉素、硫酸慶大霉素配成濃度為100單位/mL時，通過藥敏紙片法和打孔法，測定其抑菌圈直徑來進行比較兩種方法對細菌的耐藥性。結果：在100單位/mL的藥液濃度時，抑菌效果打孔法優于藥敏紙片法。結論：在同一濃度時打孔法的抑菌效果優于紙片法。

    藥敏紙片法是最常用的一種試驗方法，能直接體現出抗菌藥物的抗菌效用。其優點是直觀明顯、對比鮮明，有一定的實驗依據。打孔法僅用1個打孔器，省去了數量較多的紙片和藥物的浪費。由于液體的表面張力作用，孔中液體在較低斜度下不會外流，能獲得理想的圓形抑菌圈。

    1  材料與方法

   （1）材料。藥物為青霉素、鏈霉素和硫酸慶大霉素，購自華北制藥股份有限公司。菌種為大腸桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌和產氣桿菌，由安徽科技學院動物醫學實驗室保存。培養基和試劑為普通營養瓊脂、蒸餾水、磷酸二氫鉀和生理鹽水。儀器為恒溫水浴培養箱、超凈工作臺和高壓蒸汽滅菌器。

   （2）方法。藥物配制參照《抗生素藥品檢驗》的配制方法。培養基制備。在容量為1000mL的三角燒瓶中加入蒸餾水1000mL，放在電爐上加熱。用天平準確稱取35.0g營養瓊脂，放入三角燒瓶中并不斷攪拌使瓊脂完全溶解，然后放入高壓滅菌鍋中經（121℃，20分鐘）高壓滅菌，取出趁熱倒入經過高壓滅菌的培養皿中，厚度約3～5mm，冷卻凝固后備用。菌種活化。將4種菌種分別接種至普通營養瓊脂斜面后，置37℃下培養箱中過夜備用。

    濾紙片的制備及處理。將普通定性濾紙用打孔機打成若干圓形紙片，直徑為5.0mm，置于干燥潔凈的試管內，塞上棉塞，放入高壓滅菌鍋中經(121℃，20分鐘)高壓滅菌后，取出放入恒溫干燥箱內進行干燥。取一定數量紙片，分別放入100單位/mL 的各種藥物中，浸潤后備用。接種培養。分別取上述菌株的新鮮培養物，在無菌操作條件下，用不同涂布棒均勻涂抹在接種過不同菌種的瓊脂培養基上，再用無菌鑷子，將在藥液中浸潤的紙片均勻間隔貼于各培養基表面，再用無菌吸管在接種過不同菌種的培養基上打孔，將藥液用移液槍移入孔內，各藥液對每種試驗菌均做3個重復。貼入時標記起始位置，按順時針或逆時針方向將濾紙片順序貼入，輕壓紙片使接觸良好。放入37℃恒溫培養箱中，24小時后取出，觀察抑菌圈，測量并記錄結果，取抑菌圈直徑平均值。抑菌圈直徑測量參照《微生物和檢驗技術》判定結果，用抑菌圈的直徑表示，抑菌圈越大，抑菌效果越好。

    2  結果與分析

   （1）抑菌圈直徑測量。濃度為100單位/mL的藥物紙片貼于4種細菌培養物上和培養24小時后，用直尺測量抑菌圈的直徑，取平均值。再將濃度為100單位/mL的藥液用移液槍移入四種細菌培養物上，用直尺測量抑菌圈的直徑，取平均值。
    由表1和表2可見，藥敏紙片法和打孔法抑菌的總體效果是青霉素對細菌的抑菌結果中，藥敏法對金黃色葡萄球菌的抑制>對產氣桿菌的抑制>對枯草桿菌的抑制>對大腸桿菌的抑制，而打孔法無抑菌效果。鏈霉素和硫酸慶大霉素對各種細菌的抑菌結果中，打孔法的效果優于藥敏紙片法。

    3  結論

    在同一藥液濃度的條件下，打孔法的抑菌效果優于藥敏紙片法。

   （謝秀麗  安徽省池州市貴池區畜牧獸醫局；蔣月美  安徽省池州市貴池區唐田鎮人民政府）